文中介绍研究的对象是药材,本研究选用连翘及连翘叶,主要对其抑菌抗炎活性及生物活性与主要成分之间的相关性进行研究。首先,赛多利斯科学仪器(北京)有限公司介绍药物研究中所需要的仪器设备,在简单介绍下赛多利斯Secura324-1CN分析天平在药物研究中的应用。
1 、实验材料
菌种和培养基:乙型溶血性链球菌,金黄色葡萄球菌,藤黄球菌,枯草杆菌,表皮葡球菌,白色葡萄球菌,肺炎链球菌,肺炎克雷伯菌,铜绿假单胞菌大肠杆菌,乙型副伤寒 沙门菌,白色念珠菌,以上菌种均购自中国食品药品检定研究院。 所用培养基均购自北京陆桥技术有限责任公司。
试药:连翘,收集不同来源、不同批号的连翘药材共16批;连翘叶1批,自制,采集当年新鲜的连翘叶子,自然晾干。
实验动物:昆明种小鼠(20.0±2.0)g,雄性,中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心;SD大鼠(200±20)g。用赛多利斯Secura324-1CN分析天平进行称重,雄性,山西医科大学实验动物中心。
2、方法
连翘苷、连翘酯苷A的测定:参考文献方法对16批连翘和1批连翘叶中连翘苷、 连翘酯苷A的含量进行测定。
连翘及连翘叶体外抑菌活性研究:连翘及连翘叶的制备: Secura324-1CN分析天平称取药材粉末0.40g,精密加40%乙醇10ml,超声处理45min,放冷,摇匀,离心,取上清液,经天津津腾0.22μm微孔滤膜过滤备用。
对照溶液制备:取连翘对照药材,同法处理。
体外抑菌活性测定: 取玻璃试管4×9支, 分别编为1~9号,前2组为样品组,第3组为对照药材组,第4组为溶剂对照组。支试管中加入MHB培养1ml,按试管稀释法将1~6管制成20~0.625mg/ml的药液,7号加菌不加药, 8号加药不加菌,9号不加药也不加菌,接着向编号 1~7 号管中 加入制备好的表皮葡萄球菌悬液(约1×105/ml),吹打混匀,37℃培养24h后每管加入5mg/ml MTT0.9%氯化钠注射液,继续培养1h,观察溶液颜色,紫色表示有菌生长,未变色表示细菌生长被抑制,未变色的最小浓度即为样品的MIC。 对16批连翘和1批连翘叶测定其MIC。
抗炎活性研究:二甲苯致小鼠耳肿胀实验:取小鼠120只,雄性,随机分为12组,即空白组、连翘7.5、3.75g/kg组(4批),连翘叶7.5、3.75g/kg组,地塞米松组。 每日灌胃1次,连续给药7d, 末次给药1h后,小鼠右耳涂以二甲苯20μl/只,左耳不涂作自身对照。 30min后,处死,用内径8mm的打孔器打下双耳相应部位耳片,利用赛多利斯Secura324-1CN分析天平称质量。
棉球所致大鼠肉芽肿增生实验: 取健康SD大鼠80只,随机分为8组,即正常对照组、模型对照组、连翘2.5g/kg组(连翘4批),连翘叶组,地塞米松组,每日给药1次,连续14d。给药第5天,除空白组外将大鼠乙醚浅麻醉,在双侧腹股沟皮下植入(20.0±1.0)mg的灭菌棉球各1个。 术后第11天处死动物,剥离出包有肉芽组织的棉球,置60℃烘箱12h烘干,称质量,取2个棉球重量均值减去棉球重量40mg,即为肉芽组织干质量,计算每100g体质量肉芽组织干重和药物对肉芽组织形成的抑制率。
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